Метод окраски зерен волютина по Нейссеру

• На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2 - 3 минуты

• добавить раствор Люголя на 10 - 30 секунд промыть водой

• мазок докрасить водным раствором везувина или хризоидина в течение 30 - 60 секунд

• промыть водой, высушить, микроскопировать желтый цвет.

Зерна волютина имеют щелочную реакцию, поэтому воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма, имея кислую реакцию, воспринимает везувин и окрашивается в желтый цвет.

Окраска жгутиков по методу Лёффлера

• Для окраски жгутиков используют клетки 12—16-часовой культуры.

• Клетки легко теряют жгутики в момент приготовления мазка, поэтому необходимо обращать внимание на чистоту стекла и способ нанесения на него суспензии.

• Высушенный мазок заливают протравой (смесь равных объемов гипертонического раствора хлорида натрия и танина) на 15 мин, промыть дистиллированной водой

• Препарат окрасить в течение 5 мин разбавленным фуксином Циля, промыть водой, высушить на воздухе.

Обращают внимание на расположение жгутиков, их количество и длину.

Понятие об идентификации бактерий

 

Комплексная система идентификации бактерий

Микробиологический анализатор Multiskan FC

Позволяет идентифицировать более 500 видов микроорганизмов и патогенных грибов.

Система микробиологической диагностики включает оценку данных, полученных в результате проведения исследований по идентификации микроорганизмов и определении их антибиотикочувствительности in vitro и коррекцию их на основании сведений о природной устойчивости или чувствительности отдельных микроорганизмов или их групп, о распространении среди них приобретенной резистентности, а также о корреляции данных по чувствительности, полученных in vitro, клинической эффективности антибактериальных препаратов.

 

Способы культивирования

Методы культивирования анаэробных микроорганизмов

1. Посев уколом анаэробных бактерий в столбик сахарного агара

2. Изолированные по методу Вейнберга колонии анаэробов в сахарном агаре

3. Метод Виньял-Вейона

• в расплавленный и остуженный до 50°С агар вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. Через 24 — 48 часов столбике агара вырастают ясно видимые колонии микроорганизмов — анаэробов

4. Анаэростатпредназначен для культивирования в чашках Петри микроорганизмов группы облигатных анаэробов и микроаэрофилов.

Анаэростат представляет собой цилиндрическую емкость, герметично закрываемую с помощью ленточного замка. В крышку вмонтирован вакууметр и вентиль для присоединения вакуумного насоса и внешней системы источника газа.

Создание анаэробной или микрофильной атмосферы для культивирования микроорганизмов в анаэростате может производиться двумя способами:

• с помощью газогенерирующих пакетов типа Газпак;

• вакуумзаместительным заполнением бескислородными газами (газовыми смесями).

Аппарат Киппа

• Для выращивания анаэробов в бескислородной среде можно использовать водородную атмосферу, образующуюся в аппарате Киппа действием серной кислоты на металлический цинк. Водород перед поступлением в сосуд с культурами проходит для удаления остатков кислоты и О, через промывные склянки с 10 % раствором азотнокислого свинца и с щелочным раствором пирогаллола.

СРЕДА КИТТА-ТАРОЦЦИ

Среда Китт-Тароцци — содержит кусочки печени, обладающие высокой адсорбционной способностью, 0.5% глюкозы. Перед посевом среду кипятят на водяной бане не менее 15 минут, сверху заливают слоем вазелиного масла, чтобы предохранить посев от проникновения кислорода.

Среда Вильсона — Блера

Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий, хлорид железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления сернисто-кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с хлоридом железа, образуют осадок черного цвета -сернистое железо.

СОВМЕСТНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ
(МЕТОД ФОРТНЕРА)

В чашке с сахарным агаром вырезается «полоска» для невозможности смешивания разных культур бактерий.

С одной стороны выполняется посев культуры аэробных бактерий, с другой – умеренно строгих анаэробов.

Чашка закрывается, ее края запаиваются парафином (с целью не допустить попадания воздуха, кислорода внутрь чашки). Сначала вырастают в присутствии кислорода аэробы, а затем – анаэробы.