Тема: Определение глюкозы в биологических жидкостях глюкозооксидазным способом

Цель: Определить содержание глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом.

Принцип метода:Определение глюкозы основано на реакции, катализируемой глюкозооксидазой:

глюкозооксидаза

Глюкоза +O₂−−−−−−−−−−−→глюколактон + H₂О₂

Образующаяся в ходе данной реакции перекись водорода вызывает окисление субстратов пероксидазы с образованием окрашенного продукта.

Ход работы: В2 пробирки вносят по 2 мл рабочего реактива (фосфатный буфер, субстраты пероксидазы + глюкозооксидазы в отношении 40:1). В одну из пробирок вносят 0,05 мл стандартного раствора глюкозы концентрации 10 ммоль/л. В другую - 0,05 мл сыворотки крови. Растворы встряхивают и инкубируют при комнатной температуре 20 минут.

После инкубации измеряют оптическую плотность растворов на ФЭК при длине волны X = 490 нм. Кювета с длиной оптического пути, равной L = 5 мм. Раствор сравнения - рабочий реактив.

Расчет концентрации глюкозы:

где
Е_о - оптическая плотность в образцах сыворотки;

Е_ст - оптическая плотность стандартного раствора глюкозы.

Результат анализа:

Вывод:

Дата:                                                                    Подпись преподавателя:

Вопросы для подготовки к семинару «Обмен углеводов»:

1. Основные углеводы пищи. Переваривание углеводов.

2. Глюкоза как важнейший метаболит углеводного обмена: общая схема источников и путей расходования глюкозы в организме.

3. Анаэробный гликолиз. Субстратное фосфорилирование.

4. Аэробный гликолиз – основной путь катаболизма глюкозы у человека.

5. Биосинтез глюкозы – глюконеогенез.

6. Взаимосвязь гликолиза в мышцах и глюконеогенеза в печени. Глюкозо-лактатный цикл Кори.

7. Пентозофосфатный путь превращения глюкозы.

8. Свойства гликогена как резервного полисахарида. Биосинтез гликогена.

9. Распад гликогена – гликогенолиз. Мобилизация гликогена в печени.

10. Роль инсулина, глюкагона, адреналина в обмене углеводов.

11. Патологии углеводного обмена.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ 7

Семинар Обмен углеводов

Вопросы к контрольной работе по теме: Энергетический обмен. Обмен углеводов

1 Введение в обмен веществ. Питание, метаболизм, выделение продуктов метаболизма.

2 Эндергонические и экзергонические реакции в живой клетке. Реакции с сопряженными потенциалами. Макроэргические соединения.

3 Энергетический обмен. Общие пути катаболизма. Схема катаболизма основных питательных веществ - углеводов, жиров, белков, (аминокислот); понятие о специфических путях катаболизма до образования пирувата из углеводов и большинства аминокислот до образования ацетил-КоА из жирных кислот и некоторых аминокислот и общих путях катаболизма (окисление пирувата и ацетил-КоА).

4 Митохондриальная цепь переноса электронов. Дегидрирование субстратов и окисления водорода (образование воды), как источник энергии для синтеза АТФ. Дегидрогеназы и первичные акцепторы водорода НАД и флавопротеиды; НАД Н - дегидрогеназы.

5 Строение митохондрий, структурная организация цепи переноса электронов и протонов. Цепь переноса электронов как часть системы дыхания, начинающейся вдыханием воздуха и связыванием кислорода.

6 Окислительное фосфорилирование: коэффициент Р/О.

7 Хемио-осмотическая теория Митчелла.

8 Разобщение тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования; терморегуляторная функция тканевого дыхания.

9 Окислительное декарбоксилирование пировиноградной кислоты: строение пируватдегидрогеназного комплекса.

10 Цикл лимонной кислоты. Связь между общими путями катаболизма и цепью переноса электронов и протонов.

11 Аллостерические механизмы регуляции цитратного цикла. Образование углекислого газа при тканевом дыхании.

12 Активаторы и ингибиторы ЦТК.

13 Анаболические функции цикла лимонной кислоты.

14 Нарушения энергетического обмена: гипоэнергетические состояния и их причины.

15 Основные углеводы организма человека, их содержание в тканях, биологическая роль. Основание углеводы пищи.

16 Переваривание углеводов. Глюкоза как важнейший метаболит углеводного обмена: общая схема источников и путей расходования глюкозы в организме, катаболизм глюкозы.

17 Анаэробный распад глюкозы (гликолиз). Гликолитическая оксидоредукция; пируват как акцептор водорода; субстратное фосфорилирование. Распределение и физиологические значение анаэробного распада глюкозы.

18 Аэробные распад - основной путь катаболизма глюкозы у человека и других аэробных организмов.

19 Биосинтез глюкозы (глюконеогенез) из молочной кислоты и других веществ.

20 Представление о пентозофосфатном пути превращения глюкозы. Окислительные реакции (до стадии рибулозо-5-фосфат).

21 Обмен фруктозы и галактозы.

22 Обмен сахарозы, лактозы, мальтозы.

23 Наследственные нарушения обмена моносахаридов и дисахаридов: галактоземия, непереносимость дисахаридов.

24 Свойства и распространение гликогена как резервного полисахарида. Биосинтез гликогена. Мобилизация гликогена. Физиологическое значение резервирования и мобилизации гликогена.

25 Роль печени в углеводном обмене.

26 Взаимосвязь гликолиза в мышцах и глюконеогенеза в печени (цикл Кори).

27 Регуляция углеводного обмена.

28 Патологии углеводного обмена.

29 Сахарный диабет, биохимические характеристики патогенеза и стратегия лечения.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ 8