Определение чувствительности

микроорганизмов диско-диффузионным методом:

1 – микроорганизм чувствителен (Ч) к антибиотику; S

2 – микроорганизм умеренно устойчив

(УУ) к антибиотику; I

3 – микроорганизм устойчив (У) к антибиотику R

(англ: sensitive – S, intermediate – I, resistant – R)

 

Метод Е-тестов

Принцип метода: определение чувствительности микроорганизма проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

 

МИК =16 мг/л

 

Рисунок 2.Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов

Метод серийных разведений в бульонной среде

Принцип метода: в пробирках, содержащих 1 мл Мюллер-Хинтон бульона, готовят серийные двукратные разведения антибактериального препарата, например 100 мкг/мл – 1-я, 50 мкг/мл – 2-я, 25 мкг/мл – 3-я, 12,5 мкг/мл – 4-я и т.д. Затем в каждую пробирку вносят 0,1 мл испытуемой бактериальной суспензии. Одновременно ставят контроль роста (1 мл Мюллер-Хинтон бульона и 0,1 мл суспензии бактерий). Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч., после чего отмечают результаты. Отсутствие помутнения среды свидетельствует о задержке роста бактерий в присутствии данной концентрации препарата.

Рисунок 3. МПК=МИК= 4 мг/л

Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде

Минимальная подавляющая (ингибирующая) концентрация (МПК или МИК) – наименьшая концентрация антибиотика (в мкг/мл или мг/л), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий.

2► Определение чувствительности разных штаммов стафилококков к антибиотикам методом стандартных дисков

Антибиотик	Диаметр зон подавления роста, мм	Характеристика штамма (Ч, УУ, У)
Доксициклин	22	Ч
Оксациллин	13
Ципрофлоксацин	23
Эритромицин	15
Гентамицин	25

 

Пограничные значения зон подавления роста (мм) антибиотиков в отношении стафилококков

Антибиотик	Обозначение диска	Диаметры зон подавления роста (мм)
		Устойчивые	Промежуточные	чувствительные
Доксициклин	Dо	≤12	13-15	≥16
Оксациллин	Ox	≤10	11-12	≥13
Ципрофлоксацин	C	≤15	16-20	≥21
Эритромицин	E	≤13	14-22	≥23
Гентамицин	G	≤12	13-14	≥15

Вывод (вписать):

Исследуемая культура стафилококка является чувствительной к ________________________________

умеренно устойчивой к _________________________________________________________________________,

устойчивой к _________________________________________________________________________________.

 

Достоинства метода: легковоспроизводимый

 

Недостатки метода: качественный метод, не позволяет определить МПК препарата./

 

3►Определение минимальной подавляющей концентрации (МПК) пенициллина методом серийных разведений (см. рисунок №3). Вывод: МПК пенициллина для исследуемого штамма составляет 4 мг/л

 

Достоинства метода:   количественный, позволяет определить МПК препарата

 

Недостатки метода: трудновоспроизводимый метод

ЗАНЯТИЕ № 8