Тема: Определение активности панкреатической липазы

Цель: Исследовать условия действия липазы поджелудочной железы.

Принцип метода: Липаза- малоспецифический фермент, который действует на многие жиры при рН 9,0. Липаза гидролитически расщепляет пищевые жиры и в первую очередь эфирную связь в α - положении. Скорость действия липазы в отдельных порциях жира молока можно узнать по количеству жирных кислот, образующихсяпри гидролизе жира за определённый промежуток времени. Количество жирных кислот определяют титрованием щелочью в присутствии фенолфталеина

Схема постановки опыта: В колбу для титрования отбирают 1 мл молока (разведенного 1:10), добавляют 1 каплю раствора фенолфталеина и титруют 0,01 Н, NаОН до слабо-розового окрашивания. При первом титровании нейтрализуются органические кислоты - молочная и другие, которые присутствуют в молоке до начала действия липазы (V₀ при t=0 мин.).

 

Готовят две пробирки с образцами 1 и 2:

 

Компонент инкубационнойсмеси	Образец 1	Образец 2
Молоко (разведённое 1:10), мл
Панкреатическая липаза, мл
Желчь, мл	-

Приготовленные инкубационные смеси тщательно перемешивают.

Смесь в колбах помещают в термостат, температура которого 38-40° С, и через определённые интервалы времени отбирают из каждой пробирки / не вынимая их из термостата /по 1 мл смеси и титруют 0,01 моль/л NaOН /Vi/.

 

Данные фиксируют в таблице:

 

t, мин. Vi 0,01н NaOH, мл
Опытная проба без желчи
Опытная проба с желчью

На основании полученных данных строят график, где

V= Vi, мл - активность липазы, выраженная объёмом гидроксида натрия, пошедшего на нейтрализацию жирных кислот, образовавшихся за данный отрезок времени.

Выводы: (сравнить активность панкреатической липазы)

Дата: Подпись преподавателя:

Тема: Обмен липидов. Биологическая роль холестерина

Вопросы для подготовки к занятию:

1.Напишите химические формулы неэтерифицированного и этерифицированного холестерина

2. Укажите основные пути использования холестерина в организме

3. Укажите транспортные формы липидов в сыворотке крови, их происхождение и функции

4. Изобразите в виде схемы эндогенный синтез холестерина

Выполните задания:

1. Выберите направления использования холестерина в печени и коре надпочечников:

А. Печень	1. Построение мембран
Б. Кора надпочечников	2. Синтез холевой кислоты
В. Оба	3. Синтез витамина D3
Г. Ни один	4. Синтез кортизола

 

2. Во время обеда человек получил с продуктами животного происхождения 0,5 г холестерина. Укажите, может ли этот стерин попасть в клетки печени. Составьте схему, подтверждающую правильность вашего ответа

3. Выберете непосредственного предшественника мевалоната в синтезе холестерина и напишите его формулу:

А) Ацетил-КоА

Б) Изопентенилпирофосфат

В) Ацетоацетил-КоА

Г) 3-Гидрокси-3-метилглутарил-КоА

Д) Мевалонилпирофосфат

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 10

Тема: Определение общего холестерина в сыворотке крови

Цель: определить содержание холестерина в сыворотке крови фотоэлектрокалориметрическим методом

Предостережение

Все пробирки, пипетки, кюветы должны быть сухими. Рабочий реагент представляет собой смесь концентрированных кислот.

Схема постановки опыта

	Опытная проба	Калибратор	Контроль
Сыворотка, мл	0,02	-	-
Калибратор, мл	-	0,02	-
Вода, мл	-	-	0,02
Рабочий реагент, мл	2,0	2,0	2,0

Перемешать реактивы и инкубировать 20 мин при температуре 20-25 °С.

Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм при длине волны 500 нм(зеленый светофильтр).

Расчет. Содержание холестерина в сыворотке крови рассчитывается по формуле:

С= (Е опытн.пробы: Е калибратора) х 5,17 (ммоль/л),

где

С - концентрация холестерина в исследуемом образце (ммоль/л),

Е опытной пробы - оптическая плотность исследуемого образца,

Е калибратора - оптическая плотность калибратора,

5,17 ммоль/л - содержание общего холестерина в калибраторе.

Нормальные показатели - до 5,17 ммоль/л

Пограничные показатели - 5,17 - 6,5 ммоль/л

Патологические показатели - выше 6,5 ммоль/л

Результаты анализа:

Выводы:

Дата: Подпись преподавателя:

ЗАДАНИЯ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ