II. Определение целлюлолитической активности

Техника. Исследуемые бактериальные культуры засевают «медальонами» на поверхность минимальной глюкозо-солевой среды, содержащей 0,2% растворимой целлюлозы. После 48 часов инкубирования при 28^оС чашки Петри со средой заливают 3-4 мл 0,1% раствора Конго красного и выдерживают около 30 мин. После этого краситель сливают, а среду промывают 8% раствором NaCl. Наличие светлых неокрашенных пятен в месте роста и вокруг “медальонов” бактерий свидетельствует о продукции ими целлюлолитических ферментов.

 

III. Определение пектолитической активности

Техника. Исследуемые бактериальные культуры засевают «медальонами» на поверхность полноценной питательной агаризованной среды, содержащей ионы Са²⁺, с нанесенным на нее полипектатным гелем. После инкубирования в течение 24 часов при 28^оС продукцию пектолитических ферментов регистрируют по образованию лунок на поверхности полипектатного геля.

 

 

Задача 2

Факультативные анаэробные спорообразующие бактерии рода Bacillus

 

1 занятие

Цель занятия: определение особенностей морфологии клеток и колоний бактерий рода Bacillus, выявление эндоспор у исследуемых бактерий.

Штаммы: в работе используют бактерии рода Bacillus (B.subtilis, B.cereus, B.megaterium, B.brevis, B.mycoides, B.polymyxa).

Среды: полноценная питательная агаризованная среда.

Красители и реактивы: 0,5% карболовый раствор генцианового фиолетового, раствор Люголя, 1% водный раствор фуксина, 96^о этиловый спирт, 5% раствор малахитового зеленого, 0,5% раствор сафранина, 0,1% раствор Конго красного, 8% раствор NaCl.

Оборудование: бактериологическая петля, спиртовка, предметные стекла, световой биологический микроскоп Биолам.

 

Задание на занятие:

1) учет результатов по выявлению продукции пектолитических, протеолитических и целлюлолитических ферментов у бактерий рода Erwinia;

2) выявление эндоспор у бактерий рода Bacillus по методу Шефера-Фултона;

3) окраска бактерий рода Bacillus по методу Грама;

4) рассев бактерий рода Bacillus методом истощающего штриха на ППА;

5) оформление таблицы “Особенности морфологии клеток бактерий разных видов рода Bacillus” (форма клеток, сочетание клеток, наличие эндоспор, результат окрашивания по методу Грама).

Ход работы:

I. Окраска эндоспор по методу Шефера-Фултона

Техника. 1. Фиксированный мазок покрывают кусочком фильтровальной бумаги, на него наносят 5-6 капель раствора малахитового зеленого и нагревают 2-3 раза до появления паров, держа стекло над пламенем спиртовки.

2. Бумажку снимают, препарат промывают водой и в течение 30 сек докрашивают раствором сафранина.

3. Препарат промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют, пользуясь иммерсионной системой.

В результате споры окрашиваются в зеленый цвет, а клетка - в красный.

 

II. Окраска бактерий по методу Грама

Техника окраски приведена выше.

 

III. Посев бактерий методом истощающего штриха

с целью получения изолированных колоний

Техника посева приведена выше.

 

 

2 занятие

Цель занятия: изучение морфологии колоний, формируемых разными видами Bacillus на ППА.

Штаммы: в работе используют бактерии рода Bacillus (B.subtilis, B.cereus, B.megaterium, B.brevis, B.mycoides, B.polymyxa).

Оборудование: стереоскопический бинокулярный микроскоп.

 

Задание на занятие:

1) визуальная и стереомикроскопическая оценка морфологии выросших на ППА колоний бактерий рода Bacillus;

2) оформление таблицы “Особенности морфологии колоний, сформированных на ППА разными видами бактерий рода Bacillus”.

 

Ход работы:

Оценить визуально и описать морфологию колоний бактерий рода Bacillus, выращенных на ППА. Выявить существующие видовые отличия характера формирования колоний на агаризованной среде. На основании результатов визуального контроля оформить таблицу.

Задача 3

Актиномицеты

 

1 занятие

Цель занятия: выявление особенностей роста и спорообразования актиномицетов на агаризованных питательных средах.

Штаммы: в работе используют представителей родов Actinomyces, Streptomyces, Nocardia, Rhodococcus.

Среды и красители: полноценная питательная агаризованная среда (ППА), крахмало-аммиачный агар, среда Чапека, дистиллированная вода или 1% водный раствор метиленового синего.

Оборудование: бактериологическая петля, спиртовка, предметные и покровные стекла, стереоскопический бинокулярный микроскоп, световой биологический микроскоп Биолам.

 

Задание на занятие:

1) изучение характера роста актиномицетов и образования ими мицелия на различных агаризованных средах и выявление существующих отличий;

2) исследование формы спор и спороносцев у исследуемых бактерий методом “отпечатков”;

3) оформление таблицы “Особенности роста и спорообразования актиномицетов на агаризованных средах”.

 

Ход работы:

I. Рост актиномицетов на средах различного состава

Определить различия характера роста и формирования мицелия на агаризованных средах различного состава. Выявить наличие «атипичного роста» на ППА. Определить плотность и консистенцию колоний в зависимости от питательной среды.