Общие методы минерализации биоматериала, деструкция БМ.

Общ м-ды мин-ции прим. Общ. анализе БМ на большую группу МЯ. Реагенты: различные окислители (азотная, серная, хлорная ки­слоты, пероксид водорода, хлорат калия и др). Наиболее часто применяются м-ция серной и азотной к-ми (+: быстрота и полнота разрушения БМ, малые объемы мин-та; -:потеря Нg2+), мин-ция серной, азотной и хлорной (намного быстрее, ок-ся даже трудно ок-мые к-ты – триптофан, тирозин, в-ва ок-ся до высшей ст. ок-я, малый расмход мин-та: -: бальшие потери ртути, м.б. взрыв при ­С HClO4)

Деструкция биоматериала - первая стадия мин-ции, заключается в разрушении форменных элементов и продолжается, при не очень жирном объекте, 30-40 минут (объект бурого или желтого цвета с жирными каплями). Температура 150С достигается путём приподнятия колбы на штативе на 3-5 см выше пламени горелки. Деструкция продолжается до тех пор, пока кашицеобразная проба биоматериала не приобретёт вид раствора.

Минерализация серной и азотной кислотами

Подгот для минер объект иссл пом в к Кьельдаля емк 500-800 мл и залив см равн об дист воды, конц серной и азотной кислот (75 мл смеси вводят для обработки 100 г био мат). Колбу закр в штативе в верт полож так, чтобы дно ее нах на расст 1-2 см от асб сетки. Над колбой укр делит воронку с азотной кислотой (1: 1). Когда прибор подг, нач осторожно нагр колбу.

В проц разр орг вещ обычно наблюд две стадии. Прежде всего происходит разрушение форм элем - деструкция. Эта стадия непродолж, всего 15-30-40 минут. В проц дестр нагр не должно быть сильным, иначе возможно обильное пенообраз (при объекте, богатом жиром) и выбрас части иссл мат из колбы, а также потеря ртути вместе с выдел окислами азота. По окончании деструкции получается прозря жидк, окрашв желт или бур цвет. Затем колбу с объектом исслед опуск на асб сетку и усил нагр, хотя и здесь, на стадии глуб жидкофазн окисл орг веществ, необходимо избегать обугл объекта исслед, особенно жира, во избежание потерь соединений ртути и мышьяка.

Стад разр жира протек при пост доб (по каплям) аз кисл. Нет необх допускать большой изб аз кисл, поэт ее добт с таким расчетом, чтобы бурые пары окислов азота, образующ в колбе в проц мин-ции, не выход из колбы и не пост в воздух лаборатории. Стадия разр жира длится 3-4 часа, а при более слабом нагр и объектах исслед, содерж много жира, 6-8 часов. Причину длит разруш жира, по-видимому, нужно искать в летучести жиров и жирных кислот, их составляющих. Части жира или жирные кислоты возгоняются, конденс в менее нагр частях колбы, затем постеп стек в колбу, где медленно разруш под влиян к-т.

Разруш серн и азотн к-и считают законч при таком сост мин-та, когда бесцв жид при нагр ее без доб азотной кислоты до стад обильн выдел бел паров серной к-ты не темнеет.

Минерализация серной, азотной и хлорной кислотами

Дост и нед метода минер серн, аз и хл кисл-ми. 1. Полн окисл орг вещ (достигает 99°/о). 2. Окисл больш поливалентных ионов до высш вал-ти. 3. Сокр в 21/2-3 раза затр времпо сравн с мет минер серн и азотн кисл. 4. Небольшой расход окисл. 5. Небольшие объемы минер-ов.

Осн нед метода минер серной, азот и хл кисл, так же как и метода минер серной и азотной кисл, является потеря больших кол-в ртути. Потери удается несколько сократить, проводя окисление в аппарате Бетге. При спец зад провед исслед на наличие ртути целесообразно использовать особые методы.

Техника окисления серной, азотной и хлорной кислотами. Тщат измельч био мат помещ в колбу Кьельдаля емк 500 мл или в колбу для сжиг аппарата Бетге. Аппарат Бетге предст собой замкн сист и позвулавл лет прод окисл. К иссл мат приб через воронку по 25 мл конц аз и серн кисл и 35 мл 37% или 42% р-ра хлорной кислоты. Окисление орг вещ ведут при постеп усил нагр, добавляя при обугливании минерализата конц азотную кислоту. Вскоре обугл усиливается и над поверхностью минерализата появл пары хлорн анг. Нагр либо прекр, либо сильно ослабл и продт окисление, добавляя по каплям 35-45% раствор азотной кислоты. Как только мин-т станет прозр, провер полноту окисл орг веществ, для чего к капле слегка охлажд и разб дист водой мин-та прибавляют 25% раствор аммиака. Если окисление прошло до конца, раствор должен окр в слабо желт, но не в ор цвет (реакция на наиболее трудно окисл аминокислоты: фенилаланин, тирозин и триптофан). При наличии в минерализате хрома критерием конца минерализации может служить изменение окраски из зеленой в желтую за счет окисления Сr3+ в CrVI.