Общие принципы и методы получения диагностических и лечебных сывороток.

Диагностические сыворотки – препараты, содержащие антитела, полученные из крови животных (лошадей, кроликов, морских свинок), иммунизированных живыми или убитыми микроорганизмами, отдельными антигенами микробов, их токсинами или анатоксинами.

Агглютинирующие сыворотки
Сыворотки получаются путем иммунизации животных соответствующими микробами. В качестве продуцентов агглютинирующих сывороток могут быть использованы кролики, бараны, козы, ослы и лошади. Наиболее свободными от неспецифических антител являются сыворотки кроликов. Для иммунизации животных можно применять живые и убитые культуры, являющиеся типичными по своим морфологическим, культуральным, биохимическим, серологическим и антигенным свойствам. Лучшие результаты получаются при применении формалинизированных и обработанных парами формалина микробных взвесей. Иммунизацию проводят путем введения антигена в краевую ушную вену, начиная с 500 млн. микробных тел в 1 мл и увеличивая дозу вдвое при последующих введениях. Для получения полноценных сывороток обычно бывает достаточно 3-4 инъекций с интервалами в 5 дней. На 5-7 день после третьей иммунизации берется проба крови и проверяется титр сыворотки. Титром сыворотки считается то наибольшее ее разведение, с которым получается реакция агглютинации соответствующей культуры, оцениваемая тремя крестами при помощи агглютиноскопа. Плазму дефибринируют раствором хлористого кальция. К полученной сыворотке добавляется консервант. Сыворотка (в нативном виде) выдерживается не менее 1 месяца при температуре 4-8 °С для стабилизации титра, после чего определяется окончательный титр ее к гомологичным штаммам и наличие групповой реакции путем постановки реакции агглютинации с набором соответствующих живых культур в количестве 3-5 штаммов каждого вида.

Преципитирующие сыворотки Преципитирующие сыворотки применяются для постановки реакций преципитации с целями диагностики некоторых инфекционных заболеваний, для определения природы неизвестного белка при условии, если его можно получить в коллоидном состоянии, в судебно-медицинской практике для распознавания видовой принадлежности крови, в санитарии, химии и т.д.
Преципитирующие сыворотки получаются путем искусственной иммунизации животного живыми или убитыми микробами, а также разнообразными лизатами и экстрактами микробных клеток. Наилучшие преципитирующие сыворотки получаются при иммунизации полным антигеном или соляно-кислой вакциной. Применяемую для иммунизации животных экстрагированную соляно-кислую вакцину готовят следующим образом: густой смыв суточной культуры дважды промывают (при центрифугировании) физиологическим раствором и обрабатывают десятикратным количеством 0,2 N соляной кислоты в течение 18-24 часов при температуре 37 °С. Затем центрифугируют, полученный осадок микробных тел дважды промывают физиологическим раствором и нейтрализуют 25 % раствором углекислой соды. Полученную вакцину оставляют в виде осадка.

Лечебная сыворотка - это препарат плазмы крови без фибриногена, содержащие готовые антитела, которые образовались в крови животного, ранее зараженного данным возбудителем.

К ним относятся антитоксические, антибактериальные, антивирусные сыворотки, а также иммуноглобулины. Антитоксические сыворотки получают методом гипер-иммунизации крупных животных (обычно лошадей) путем парентерального введения нарастающих доз анатоксинов, затем соответствующих экзотоксинов (см. Антитоксины). Антитоксические сыворотки применяют для пассивной иммунизации.

Получение иммунных сывороток включает: подготовку соответствующего иммуногена, т. е. вещества, стимулирующего продукцию антител; иммунизацию животных; контроль полученных сывороток. Для получения сывороток против таких гаптенов, как фармакол. препараты или низкомолекулярные гормоны, применяют в качестве иммуногена, или иммунизирующего препарата, конъюгатгаптен-носитель.