Обнаружение гонококков в исследуемом материале, окрашенном по модифицированному способу Грама

Принцип. Метод основан на свойстве гонококков и других грамотрицательных микроорганизмов при обесцвечивании их в этиловом спирте отдавать основной фиолетовый краситель и докрашиваться в дальнейшем дополнительным оранжево-красным.

Реактивы.

1. Водный раствор кристаллвиолета (10 г/л): 1 г кристалл-виолета растворяют в 100 мл кипящей дистиллированной воды, раствор фильтруют в горячем виде через бумажный фильтр.

2. Водный раствор Люголя: 2 г йодида калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды, в полученном растворе рас творяют 1 г чистого йода, фильтруют через бумажный фильтр.

3. 96° этиловый спирт.

4. Водный раствор нейтрального красного (10 г/л): 1 г ней трального красного растворяют в 100 мл дистиллированной воды и фильтруют через бумажный фильтр.

Ход определения. Препарат покрывают полоской фильтровальной бумаги и заливают водным раствором кристаллвиолета на I мин. Следят, чтобы между фильтровальной бумагой и стеклом не было пузырьков воздуха, их удаляют, придавливая полоску бумаги стеклянной палочкой или пипеткой. Через 1 мин бумагу снимают, препарат промывают водопроводной водой и заливают раствором Люголя, который выдерживают в течение нескольких секунд до почернения мазка. Затем остаток раствора Люголя смывают и приступают к обесцвечиванию препарата в 96° этиловом спирте. Обесцвечивание проводят под визуальным контролем, поочередно погружая и вынимая препарат из спирта, находящегося в стаканчике. Обесцвечивают препарат до тех пор, пока фиолетовые струйки красителя, стекающие с его тонких участков, не станут бледно-серого цвета. Препарат быстро промывают под струей водопроводной воды, а затем докрашивают в течение 3 мин водным раствором нейтрального красного. Препарат тщательно промывают, пока струя воды, стекающая с него, не станет прозрачной, высушивают.

При правильной окраске препарат оранжево-красного цвета на тонких участках, лилово-фиолетового на толстых. Ядра клеточных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток) должны частично удерживать основную фиолетовую окраску, т. е. в центре они должны быть окрашены в фиолетовый цвет, по периферии в оранжево-красный, а гонококки, расположенные в лейкоцитах и на эпителиальных клетках, будут оранжево-красные. Хорошее качество окраски обеспечивается своевременным прекращением обесцвечивания препарата.

При  недообесцвечивании,  когда  ядра  клеток интенсивно бкрашены в фиолетовый цвет, гонококки могут сохранять фиолетовую окраску. В переобесцвеченных препаратах стафилококки _;и стрептококки могут быть окрашены в оранжево-красный цвет и приняты за гонококки.

При бактериоскопическом исследовании идентификация гонококков производится на основании их морфологии, расположения и отношения к окраске по способу Грама. Гонококк — это парный кокк, по форме имеющий сходство с кофейными зернами, сложенными вогнутыми сторонами друг к другу. Длина его 1,8 мкм, ширина 0,7—0,8 мкм, между половинками диплококка имеется щель, равная половине одного кокка. Размножаясь делением в разных плоскостях, гонококки не образуют цепочки. При нахождении гонококка внутри лейкоцита характерно их расположение парами или группами под углом друг к другу. Часто гонококки лежат на клетках плоского эпителия рядами, располагаясь перпендикулярно друг другу внутри ряда. Частота внутри- и внеклеточного расположения гонококков зависит от периода заболевания, активности фагоцитоза, от методики взятия материала. При идентификации гонококка необходимо учитывать все три его основных признака. Положительный ответ нужно давать при обнаружении только типичных форм гонококков. Следует учитывать, что при приеме антибиотиков и сульфаниламидов гонококки могут становиться грамположительными, приобретать округлую или неправильную форму, неравномерную величину.

При хронически текущей, леченной гонорее, при подтверждении гонорейного процесса у детей и женщин в менопаузе, при установлении излеченности гонореи используется культу-ральный метод диагностики.

Трихомониаз

Трихомониаз — инфекционное заболевание, вызываемое влагалищной трихомонадой. Мочеполовому трихомониазу свойственна многоочаговость — поражаются влагалище, шейка матки, уретра, парауретральные ходы. Инфекция может проникать за внутренний маточный зев. Клинически заболевание проявляется кольпитом, уретритом, вульвовагинитом. Диагноз основывается на обнаружении трихомонад. Трихомонада — простейшее грушевидной или овальной формы величиной от 8—11 до 18—20 мкм, содержит овальное ядро, четыре жгутика, ундулирующую мембрану. Осевой стержень (аксостиль) проходит через все тело, выступая на заднем конце в виде шипа. Размножается в основном путем продольного деления. Питается преимущественно путем осмоса, иногда фагоцитоза. Паразитирует чаще во влагалище, может поражать мочеиспускательный канал, мочевой пузырь и прямую кишку.

Наиболее распространенным методом выявления трихомонад является микроскопия нативных и окрашенных мазков. Материал для исследования берут из очага поражения, чаще из заднего свода влагалища.