Вирус синдрома снижения яйценоскости-76

Характеристика возбудителя. Возбудитель ССЯ-76 — ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Adenoviridae, роду Aviadenovirus, является аденовирусом уток, патогенным для кур. Как и у всех аденовирусов, вирионы ССЯ-76 представляют собой лишенные суперкапсидной оболочки изометрические частицы диаметром 70—90 нм. Белок вириона представлен 252 капсомерами, уложенными по кубическому типу симметрии и формирующими длинные отростки.Антигенная структура. Вирус имеет группоспецифический антиген, общий для всех аденовирусов птиц, который обнаруживается в РДП, РСК. Имеется также типоспецифический антиген, присущий вирусам определенного серотипа и определяемый в РИФ. В то же время вирус ССЯ-76 не имеет антигенного родства ни с одним из вирусов 12 серотипов аденовируса кур. Гемагглютинирующая активность. Вирус ССЯ-76 проявляет гемагглютинирующую активность с эритроцитами кур, уток и гусей.Культивирование вируса. Оптимальной системой для культивирования вируса ССЯ-76 являются утиные эмбрионы и культуры клеток утиного происхождения. После адаптации возможно культивирование на эмбрионах кур и культуре клеток печени эмбрионов кур. Оптимальная температура культивирования этого вируса — 40 °С. В культуре клеток вирус вызывает образование внутриядерных включений и проявляет себя гемагглютинирующей активностью.Эпизоотологические особенности. Антитела к вирусу ССЯ-76 были выявлены у 51 % обследованных уток, у 66 % гусей и у 1 % кур. Учеными высказано предположение, что вирус ССЯ-76 персистирует в организме уток без клинического проявления. Прямой передачи вируса при контакте уток с курами не установлено. Клинические признаки. Признаки болезни обычно проявляются на 30-й неделе, при наступлении пика яйценоскости. Очевидно, латентное течение болезни переходит в острое на фоне физиологического стресса — возрастания яйценоскости и увеличения содержания гормонов.Патологоанатомические изменения. Болезнь сопровождается отеками и инфильтрацией тканей матки и яйцеводов, незначительным катаральным энтеритом. При гистологическом исследовании установлена дегенерация кальцифицирующих желез, их мононуклеарная инфильтрация, лимфоидная гиперплазия в печени, селезенке и других органах. Маточные железы в состоянии атрофии, отечны, инфильтрированы. Атрофии подвержена и фабрициева сумка.Механизмы повреждения яичной скорлупы, которые непостоянны, связывают не с гистологическими изменениями яйцеводов, а с ферментативными нарушениями в организме.

Билет 38

Очистка вирусов ультрацентрифугированием. Градиент плотности.

Из относительно небольшого объема культуральной жидкости вирус можно сконцентрировать ультрацентрифугированием. Обычно тогавирусы осаждают центрифугированием при 50 000 g в течение 2 ч. Можно использовать как угловые роторы, так и бакет-роторы в зависимости от объема материала и имеющегося оборудования. Пробирки для угловых роторов следует тщательно закрывать, лучше всего термическим способом, предложенным фирмой Beckman.

Определенной степени очистки на этой стадии можно достигнуть, наслаивая содержащую вирус жидкость на небольшой объем буферного раствора, содержащего 20% сахарозы. При этом вирус проходит через сахарозную «подушку» и образует осадок, а низкомолекулярные контаминанты, включая растворимые белки, задерживаются «подушкой». Подходящим буфером является GTNE. Соответствующий объем раствора сахарозы в этом буфере вносят в каждую пробирку. При работе с угловыми роторами следует убедиться в том, что используемый объем достаточен, чтобы полностью покрыть осадок, даже после остановки ротора. На слой сахарозы осторожно наслаивают содержащую вирус жидкость; она должна медленно стекать по стенке пробирки. Чтобы избежать перемешивания при разгоне ротора, следует использовать приспособление для медленного разгона, если оно имеется, однако это не является строго необходимым.

В данных условиях вирус образует плотный осадок. Супер-натант декантируют и остаток жидкости удаляют, оставляя пробирку в перевернутом положении. Необходимо помнить, что супернатант содержит некоторое остаточное количество инфекционного вируса, и обращаться с ним следует осторожно. Осадок вируса медленно суспендируют в GTNE; для этого раствор приливают к осадку и оставляют на ночь при 4°С или обрабатывают в течение нескольких минут ультразвуком, помещая пробирку в водяную баню.