Оценка цитотоксической активности естественных киллеров

В лабораторной практике используется метод определения функции естественных киллеров, основанный на оценке их способности лизировать трансформированные клетки, предварительно меченные радионуклидами или флуорохромами. В качестве клеток-мишеней используются клетки линии эритромиелоидного лейкоза человека К562 как высокочувствительные к литическому действию естественных киллеров. Принцип метода основан на оценке цитолиза меченых клеток-мишеней после их кратковременной инкубации с клеточными суспензиями, содержащими естественные киллеры. Цитолиз оценивается по выходу радиоактивной метки (Cr 51), предварительно введенной в клетки.

Снижение цитотоксической активности НК-лимфоцитов выявляется при многих заболеваниях, в том числе при злокачественных новообразованиях, а отсутствие наблюдается крайне редко.

2.2.5 Методы количественного определения иммуноглобулинов

Количественное содержание иммуноглобулинов является основным показателем гуморального иммунитета. Уровень иммуноглобулинов - один из показателей, используемых для оценки иммунного статуса человека. Все методы, применяемые для количественного определения иммуноглобулинов, основаны на взаимодействии антиген-антитело:

иммунодиффузия в геле (можно определять IgG, IgA, IgM, IgD)

иммуноэлекрофорез (можно определять IgG, IgA, IgM, IgD)

фотометрия (можно определять IgG, IgA, IgM, IgD)

иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ (все классы и субклассы иммуноглобулинов, IgE, секреторные иммуноглобулины, специфические антитела).

Иммунодиффузия в геле основана на использовании гелевых носителей для локализации образующегося в результате взаимодействия антигена и антитела преципитата, который выпадает в виде визуально определяемых полос или зон. Метод простой радиальной иммунодиффузии был впервые предложен Манчини в 1963 г. Принцип метода заключается в том, что на ровную поверхность равномерным слоем наносят гель, содержащий антитела (антитела к иммуноглобулинам). В геле вырезают лунки и заполняют их раствором антигена (иммуноглобулины в составе сыворотки крови или другой биологической жидкости). Молекулы антигена радиально диффундируют из лунки и, встретившись с антителами, образуют кольцо преципитации. Площадь кольца прямо пропорциональна концентрации геля в лунке. Этот метод рекомендован ВОЗ (1981) при подозрении на наличие первичного иммунодефицита.

К фотометрическим методам определения иммуноглобулинов относят нефелометрию и турбидиметрию. Взаимодействие раствора антигена с моноспецифической сывороткой приводит к образованию иммунных комплексов. Эти иммунные комплексы рассеивают проходящий световой поток, интенсивность которого можно измерить. Нефелометрия регистрирует световой поток, который рассеивается под определенным углом иммунными комплексам, взвешенными в оптически прозрачной среде. Турбидиметрия регистрирует свет, поглощаемый комплексами антиген-антитело. Интенсивность рассеянного света или разность светового потока прямо пропорциональна величине и числу иммунных комплексов.

При изучении данного раздела следует ознакомиться с лабораторными методами определения иммуноглобулинов. Основное внимание уделить клинической интерпретации вариантов изменения содержания иммуноглобулинов сыворотки крови при патологии. Так, снижение концентрации иммуноглобулинов может привести к клиническим проявлениям острых и хронических бактериальных инфекций. Подобная симптоматика сопровождает врожденные иммунодефициты и приобретенные, развивающиеся при дефиците питания, потере белка при почечной недостаточности, травме, миеломной болезни, недоношенности новорожденных и др. Дефицит IgA клинически ассоциируется с хроническими неспецифическими воспалительными заболевания респираторного тракта. Недостаток IgG2 субкласса часто приводит к клиническим проявлениям инфекций респираторного тракта (антитела против Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenzae). Повышение концентрации иммуноглобулинов, в частности IgG, наблюдается при нфекционных заболеваниях, хроническом гепатите, аутоиммунных заболеваних. Повышение IgM отмечают при инфекциях, IgM плазмоцитомах, заболеваниях печени, аутоиммунных заболеваниях, синдроме Вальденстрема.

Концентрация IgЕ в сыворотке крови повышается при аллергических заболеваниях, паразитозах, некоторых опухолевых и аутоиммунных заболеваниях. В силу вышесказанного, правильная интерпретация данных лабораторного анализа содержания иммуноглобулинов сыворотки крови пациента возможна только в результате всестороннего анализа клинических данных.