Определение содержания рибофлавина методом количественного люминесцентного анализа

Определение содержания рибофлавина методом количественного люминесцентного анализа

Цель: освоение методов количественного люминесцентного анализа, приобретение навыков работы на флуориметре «Квант», определение витамина В2 методом прямой флуориметрии.

Посуда и реактивы: Рабочий стандартный раствор. Анализируемый раствор.

Задание: выполните опыты, оформите отчёт.

Правила техники безопасности:

1. Правила работы с реактивами.

2. Правила работы с химической посудой.

3. Правила работы с нагревательными приборами.

Методические указания к выполнению лабораторной работы:

Метод основан на сравнение интенсивности флуоресценции стандартного и анализируемого растворов витамина В1 при облучении светом ультрафиолетового диапазона. Содержание витамина В1 определяют, не прибегая к построению градуировочного графика лишь по одной точке, стандартный раствор при этом готовят с содержанием рибофлавина, близким к определяемому содержанию и не превышающим 1. 10-5 моль/дм3.

 

Ход работы:

 

       Для приготовления рабочего стандартного раствора, содержащего 0,04 мг/см3 рибофлавина, взвешивают 0,0400 г рибофлавина в стаканчике или в фарфоровой чашке (навеску пересчитывают на чистую субстанцию). Затем навеску растворяют в горячей воде и переносят в мерную колбу объемом 1 дм3 на водяной бане. После охлаждения объем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор годен в течение 1 месяца при условии его хранения в бутылке из темного стекла в холодильнике при температуре от 5 до 10 0 С. В день проведения испытаний часть основного раствора переносят в стаканчик и выдерживают в темном месте до приобретения комнатной температуры, затем отбирают пипеткой 10 см3 раствора в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем раствора до метки (1 см3 раствора содержит 0,0004 мг/см3 рибофлавина). Раствор годен только в день приготовления, а между измерениями хранится в темном месте.

 

В качестве анализируемого раствора используют или готовый раствор рибофлавина, или его готовят следующим образом: навеску растертых в ступке драже массой около 1 г взвешивают с точностью до 0,0002 г, растворяют в горячей дистиллированной воде при подогревании на водяной бане и количественно переносят в мерную колбу объемом 500 см3. Затем раствор охлаждают, доводят объем до метки и фильтруют через обычную фильтровальную бумагу (первые 10 см3 отбрасывают). Из полученного раствора готовят раствор второго разведения. Для этого отбирают 10 см3 раствора в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки дистиллированной водой. Расчетное содержание рибофлавина в растворе около 0,4 мкг/см3 или 0,0004 мг/см3. Между замерами раствор хранится в темном месте.

Выполнение работы на приборе «Квант»

Определение содержания рибофлавина проводят на приборе «Квант», внешний вид которого представлен на рисунке.

1 - включение прибора в сеть; 2 - чувствительность; 3 - измерение;

4 - переключа­тель установка 100 % грубо; 5 - установка 0 %;

6 - установка 100 % точно; 7 - отсчетный лимб;

8 - шкала отсчетного лимба; 9 - первичный фильтр; 10 - вторич­ный

светофильтр; 11 - кюветное от­деление; 12 - установка нуля;

Установка чувствительности; 14 - миллиамперметр

Рисунок - Внешний вид флуориметра «Квант»

Для проведения измерений на флуориметре «Квант» необходимо соблюдать следующий порядок.

Включить прибор в сеть переменного тока с напряжением 220 В и нажать кнопку 1 «сеть», при этом загорается индикаторная лампочка.

Дать прибору прогреться не менее 60 мин.

По спектрам поглощения и флуоресценции (экспериментальные или литературные данные) выбрать необходимые первичный и вторичный светофильтры. При установке светофильтра необходимо следить, чтобы зеркальная поверхность первичного светофильтра была обращена к источнику света, а вторичного - к кювете.

   

 

 

 

 

Лист    

 

 

 

 

изм Лист

№ докум

Подп.

Дата

Обработка результатов анализа

Содержание рибофлавина в одном драже (С) в граммах вычисляют по формуле

С = , г

где А - показания флуориметра при замере испытуемого раствора;

В – показания флуориметра при замере стандартного образца;

Содержание рибофлавина в готовом растворе (С, мг/см3) вычисляют по формуле

С  = ,

где Сст – содержание рибофлавина в стандартном растворе, мг/см3.

Контрольные вопросы:

Определение содержания рибофлавина методом количественного люминесцентного анализа

Цель: освоение методов количественного люминесцентного анализа, приобретение навыков работы на флуориметре «Квант», определение витамина В2 методом прямой флуориметрии.

Посуда и реактивы: Рабочий стандартный раствор. Анализируемый раствор.

Задание: выполните опыты, оформите отчёт.

Правила техники безопасности:

1. Правила работы с реактивами.

2. Правила работы с химической посудой.

3. Правила работы с нагревательными приборами.

Методические указания к выполнению лабораторной работы:

Метод основан на сравнение интенсивности флуоресценции стандартного и анализируемого растворов витамина В1 при облучении светом ультрафиолетового диапазона. Содержание витамина В1 определяют, не прибегая к построению градуировочного графика лишь по одной точке, стандартный раствор при этом готовят с содержанием рибофлавина, близким к определяемому содержанию и не превышающим 1. 10-5 моль/дм3.

 

Ход работы:

 

       Для приготовления рабочего стандартного раствора, содержащего 0,04 мг/см3 рибофлавина, взвешивают 0,0400 г рибофлавина в стаканчике или в фарфоровой чашке (навеску пересчитывают на чистую субстанцию). Затем навеску растворяют в горячей воде и переносят в мерную колбу объемом 1 дм3 на водяной бане. После охлаждения объем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор годен в течение 1 месяца при условии его хранения в бутылке из темного стекла в холодильнике при температуре от 5 до 10 0 С. В день проведения испытаний часть основного раствора переносят в стаканчик и выдерживают в темном месте до приобретения комнатной температуры, затем отбирают пипеткой 10 см3 раствора в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем раствора до метки (1 см3 раствора содержит 0,0004 мг/см3 рибофлавина). Раствор годен только в день приготовления, а между измерениями хранится в темном месте.

 

В качестве анализируемого раствора используют или готовый раствор рибофлавина, или его готовят следующим образом: навеску растертых в ступке драже массой около 1 г взвешивают с точностью до 0,0002 г, растворяют в горячей дистиллированной воде при подогревании на водяной бане и количественно переносят в мерную колбу объемом 500 см3. Затем раствор охлаждают, доводят объем до метки и фильтруют через обычную фильтровальную бумагу (первые 10 см3 отбрасывают). Из полученного раствора готовят раствор второго разведения. Для этого отбирают 10 см3 раствора в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки дистиллированной водой. Расчетное содержание рибофлавина в растворе около 0,4 мкг/см3 или 0,0004 мг/см3. Между замерами раствор хранится в темном месте.