Подсчет патологических форм спермиев.

       При микроскопическом исследовании окрашенных мазков спермы в ней нередко выявляются спермии различной ненормальной (патологической) формы.

Наличие в сперме спермиев с ненормальной, уродливой формой называется тератоспермией (рис.7).

       Появление в эякуляте и увеличение количества спермиев с патологической формой связано с нарушением спермиогенеза, вызванного воспалительными процессами в семенниках и придаточных половых железах, нарушением терморегулирующей функции мошонки (при чесотке, экземе, обморожении и т. п.), нарушением кормового режима (при недостатке витаминов А и Е).

       В качестве конкретных причин образования патологических форм спермиев отмечают: 1) слабо развитые семенники; 2) поражение семенника и придатка (гигансткие и карликовые спермии); 3) длительные промежутки между коитусами, обусловливающие старение и распад спермиев в придатке (отдельные головки, изолированные хвостики); 4) половое истощение производителя вследствие большой половой нагрузки или недостаточного кормления (спермии с протоплазматическими капельками в области шейки, тела и хвоста – незрелые спермии).

       Закручивание хвостов спермиев в сторону происходит при смешивании спермы с гипотоническим раствором (неправильная подготовка разбавителей, попадание воды).

       Таким образом, подсчет патологических форм спермиев в сперме может служить дополнительным материалом при установлении заболевания органов размножения у производителя.

Порядок работы.

       Исследуемую свежеполученную сперму, особенно быка и барана, для уменьшения концентрации спермиев и удобства их подсчета в мазке необходимо разбавить 1%-ным раствором хлористого натрия. Сперму барана разбавляют в 20—30, а сперму быка — в 10—15 раз. Для этого к 1 мл (или капле) спермы градуированной или глазной пипеткой прибавляют соответствующее число миллилитров (или капель) 1%-ного раствора хлористого натрия. Сперму жеребца и хряка разбавляют в 2—3 раза или используют для приготовления мазков без разбавления.

       Мазок делают с помощью покровного стекла или мето­дом стекающей капли, держа стекло под углом 40—50°. Изменения форм спермиев при этом не наблюдается.

       Приготовленный мазок высушивают на воздухе и затем фиксируют. Подсушивать мазки над пламенем спиртовки не рекомендуется, так как при этом спермин деформируются.

       Фиксация мазков преследует цель закрепить спермин в таком виде, в каком они выделились из половых путей самца, и не допустить изменения их форм. Для этого предметное стекло с мазком кладут горизонтально на специальные подставки над кюветкой или стеклянной чашкой и непосредственно на мазок с помощью глазной пипетки на 1—2 минуты наслаивают 96° спирт-ректификат. Мазки можно фиксировать и 5%-ным раствором хлористого аммония (нашатыря) в течение часа.

       Зафиксированный мазок споласкивают водой и окрашивают.

       Окраску мазков проводят фуксином Пфейфера, 0,1 %-ным раствором метиленовой синьки, 1— 2%-ным раствором эозина, фиолетовыми чернилами или какой-либо другой краской. Глазной пипеткой краску толстым слоем наносят на поверхность мазка на 3—5 минут; по истечении указан­ного времени краску смывают дистиллированной или просто кипяченой водой. Мазок высушивают на воздухе, поставив его вертикально, или подсушивают фильтровальной бумагой.

     Микрокопирование и подсчет спермиев проводят при увеличении в 400—600 раз. Передвигая мазок, подсчитывают в каждом поле зрения всех спермиев, учитывая отдельно нормальные и патологические формы спермиев, после чего вычисляют процент патологических. Общее количество подсчитанных спермиев должно быть не менее 500.

       Процент патологических форм определяют по формуле:

Пр =   ^{Пф * 100}

       ⁿ

где Пр – процент патологических форм спермиев; Пф – количество подсчитанных патологических спермиев; n – общее количество подсчитанных спермиев.

Например: подсчитано всего 500 спермиев, в том числе 50 патологических форм.

Пр = ^50*100        ; Пр= 10%

                                                                                                     ⁵⁰⁰    

       Чем меньше в эякуляте производителя патологических спермиев, тем выше оплодотворяющая способность спермы.

       При нормальном состоянии и функционировании поло­вых органов производителя количество патологических форм спермиев редко достигает у барана 10—14%, быка 14— 18%, жеребца и хряка 16—20% общего числа их.

Следует учитывать, что чем больше патологических спермиев, тем меньше должна быть степень разбавления спермы.

Рис. 10 Нормальные и патологические формы спермиев:

1- нормальные; 2- гигантские и карликовые; 3- с деформацией головки; 4- с надломом шейки; 5- свободные (но ненормальные по форме) головки и бесхвостые спермии; 6- с закручиванием и ненормальным искривлением хвостов; 7- спермии и с каплей и утолщением хвоста; 8- прочие патологические формы.