Техника приготовления мазков из крови.

1. На предметное стекло, ближе к одному из его концов, нанесите пасте­ровской пипеткой каплю крови или приложите стекло непосредственно к капле крови, выступившей из пальца.

2. Быстро, чтобы не дать крови свернуться, сделайте мазок:

а) стекло положите на горизонтальною поверхность и придержите левой рукой;

б) второе - шлифованное стекло поставьте на первое под утлом 45° и подведите к капле крови до соприкосновения с ней;

в) после того, как, кровь растечется по шлифованному краю, стеклом сделайте скользящее движение справа налево, равномерно распределяя кровь тонким слоем по поверхности стекла.

Правильно приготовленный мазок имеет светло-розовую (желтоватую) окраску и одинаковую толщину на всем протяжении.

Задание № 2

Высушите препараты на воздухе при комнатной температуре или около пламени горелки, держа стекло в горизонтальном положении за края большим и указательным пальцами мазком вверх.

Внимание: при высокой температуре может произойти нарушение клеточной стенки. Будьте осторожны при проведении манипуляции около пламени горелки.

Задание № 3.

Зафиксируйте приготовленные мазки.

Цель фиксации:

1. Закрепить микроорганизмы на стекле;

2. Обезвредить материал;

3. Убитые микроорганизмы лучше воспринимают окраску.

Фиксированный мазок называется препаратом.

Способы:

1. Физический – в пламени горелки: стекло берут пинцетом или большим и указательным пальцами и троекратно проводят через верхнюю часть пламени горелки в течении 6 с.

2. Химический – в жидкости: клеточные элементы в мазках из крови и мазках-отпечатках при действии высоких температур разрушаются, поэтому их обрабатывают одной из фиксирующих жидкостей:

а) метиловым спиртом – 5 мин;

б) этиловым спиртом – 10 мин,

в) смесью Никифорова -10-15 мин,

г) ацетоном – 5 мин,

д) парами кислоты и формалина - несколько секунд.

Задание № 4.

Окрасьте препарат простым методом.

ТЕХНИКА ОКРАСКИ ПРОСТЫМ МЕТОДОМ

Окрасить приготовленный препарат водным р-ом фуксина или метиленовым синим. 1. Препарат поместите мазком вверх на мостик для окрашивания препаратов.

2. На мазок нанесите 2-3 капли водного р-ра фуксина или – 2-3 капли метиленового синего. ВНИМАНИЕ! Краска должна полностью покрывать мазок. Фуксином окрашивайте препарат в течение 1-2 мин, метиленовым синим – 3-5 мин.

3. Краску слейте в кристаллизатор. 4. Легкой струей воды смойте с препарата краситель. ВНИМАНИЕ! Смывайте до тех пор, пока вода не станет бесцветной. Осторожно, не повредите мазок!

5. Препарат высушите фильтровальной бумагой.

Задание № 5.

Проведите микроскопирование окрашенных препаратов с иммерсионной системой.

Задание № 6. Изучите методику окраски по Граму и его модификации.

Окраска по Граму (классический вариант).

Задание	Примечание
1. На фиксированный препарат наложите кусочек фильтровальной бумаги
2. На нее налейте карболовый раствор генцианового фиолетового на 1/2—1 мин.
3. Слейте краситель, не смывайте водой.
4. Налейте раствор Люголя на 1 мин.
5. Слейте раствор Люголя.
6. Нанесите 96% спирт на 1/2—1 мин до отхождения красителя.	ВНИМАНИЕ! Препарат слегка покачивайте.
7. Промойте водой.	ВНИМАНИЕ! Препарат промывайте быстро, чтобы не увеличить экспозицию спирта.
8. Окрасьте разведенным фуксином Пфеффера в течение 1/2—1 мин.
9. Краситель слейте, препарат про­мойте и высушите.

 

Результат: грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

Задание № 7.

Окрасьте препарат по Граму (классический вариант), промикроскопируйте его с иммерсионной системой и зарисуйте результат.

Задание № 8.

Изучите методику окраски по Граму в модификации Синева.

Видоизменение окраски Грама по А. И. Сине­ву.

 

Задание	Примечание
1. На препарат наложите бумажку по Синеву и нанесите несколько капель воды.
2. Снимите бумажку, не промывая препа­рата водой, нанесите на мазок пипеткой р-р Люголя на 1мин.	ВНИМАНИЕ! Мазок должен почернеть.
3. Слейте р-р Люголя и, не промывая водой, нанесите 1-2 капли 96%этилового спирта до отхождения фиолетовых струек.	ВНИМАНИЕ! Препарат слегка покачивайте.
4. Промойте препарат водой.	ВНИМАНИЕ! Промывайте быстро, чтобы не увеличить экспозицию спирта.
5. Нанесите на препарат 2-3 капли фуксина Пфеффера на 1-2мин.
6.Препарат промойте водой, просушите фильтровальной бумагой

 

Результат: грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

Задание № 9.

Окрасьте препарат по Граму в модификации Синева, промикроскопируйте его с иммерсионной системой и зарисуйте результат.

Задание № 10.

Изучите методику окраски по Граму (ускоренный метод).