Опыт 3. Количественное определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови.

 

1. В две пробирки внесите реактивы согласно следующей таблице:

 

	Контрольная проба	Опытная проба
Реагент 1 (АлАТ, субстрат), мл	0,25	0,25
Дистиллированная вода, мл	0,05	–
Сыворотка, мл	–	0,05
Перемешать и инкубировать 30 мин
Реагент 2 (динитрофенилгидразин), мл	0,25	0,25
Перемешать и оставить при комнатной температуре на 20 мин
NaOH (С = 0,4 моль/л), мл	2,5	2,5

 

2. Перемешайте и через 10 минут измерьте оптическую плотность пробы против контрольной пробы при длине волны 540 нм, кювета с толщиной слоя 5 мм.

3. Активность АлАТ в опытной пробе определите по калибровочному графику в нмоль/с×л.

Сравните полученный результат с физиологическими величинами и сделайте вывод. Опишите механизм работы кофермента трансаминаз.

 

Опыт 2. Белки как противоядие от ионов тяжелых металлов.

Взаимодействие ионов металлов с белками лежит в основе использования молока как противоядия при отравлении тяжелыми металлами.

 

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

Реактивы. 1. Амилаза, раствор.

2. Крахмал, 1%-ный раствор.

3. Ацетат свинца, 1%-ный раствор.

4. Молоко.

5. Дистиллированная вода.

6. Йод, 1%-ный раствор.

 

1. В опытную пробирку налейте по 1 мл раствора амилазы, 1%-ного раствора крахмала, 1%-ного раствора ацетата свинца (II) и молока.

2. В контрольную пробирку налейте по 1 мл растворов амилазы, крахмала, ацетата свинца (II) и воды.

3. Пробирки встряхните и выдержите 20 минут при температуре 30°С.

4. Добавьте в обе пробирки по 1 капле 1%-ного раствора йода.

 

Объясните полученные результаты.

Расчетные методы определения биологической ценности белка.

 

Продукция животноводства в целом, в первую очередь, представляет ценность как источник белка в рационе человека. Основным фактором, определяющим биологическую ценность белков пищи, является их аминограмма, т.е. количественное соотношение содержащихся в белке аминокислот, в первую очередь восьми незаменимых для человека – лизина, лейцина, изолейцина, метионина, триптофана, фенилаланина, валина и треонина.

Один из способов определения биологической ценности (БЦ) белков пищи основан на коэффициенте различия аминокислотного скора (КРАС, %). Он показывает среднюю величину избытка аминокислотного скора незаменимых аминокислот по сравнению с наименьшим уровнем скора какой-либо незаменимой аминокислоты. Аминокислотный скор определяют по формуле:

 

где АКпродукт – содержание незаменимой аминокислоты в 1 г исследуемого белка, мг; АКэталон – содержание той же аминокислоты в 1 г «идеального» (эталонного) белка, мг; 100 – коэффициент пересчета в проценты.

 

На базе данных, полученных рядом исследователей в ходе обменных опытов, международной организацией ФАО/ВОЗ (ФАО - продоволь­ственная и сельскохозяйственная организация ООН; ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения) был предложен следующий

ЭТАЛОН

содержания незаменимых аминокислот в пищевом белке:

Аминокислота	Содержание в г на 100 г белка
Изолейцин	4,0
Лейцин	7,0
Лизин	5,5
Серосодержащие аминокислоты (метионин + цистеин)	3,5
Ароматические аминокислоты (фенилаланин + тирозин)	6,0
Треонин	4,0
Триптофан	1,0
Валин	5,0

Лимитирующей биологическую ценность аминокислотой считается та, скор которой наименьший.

где ∆РАС – избыток скора аминокислоты; n – количество незаменимых аминокислот.

 

∆РАС = С_i - С_min

 

где С_i – избыток скора аминокислоты;

С_min - минимальный из скоров незаменимых аминокислот исследуемого белка по отношению к эталону, %.

 

Биологическую ценность (БЦ) пищевого белка (%) определяют по формуле:

 

БЦ = 100 – КРАС

Содержание незаменимых (для человека) аминокислот