Нанесение материала на предметное стекло.

· обезжиривают предметное стекло

· наносят каплю изучаемой взвеси микроорганизма (если материал берется с твердой питательной среды, то сначала на стекло наносится капля физиологического раствора, в которой эмульгируется материал)

2. Высушивание проводится на воздухе.

3. Фиксация – стекло помещают в сосуд с этанолом или трижды проводят над пламенем спиртовки, в результате микроорганизмы погибают и плотно фиксируются на поверхности стекла.

4. Окраска – либо водный фуксин 1-2 мин. или метиленовый синий 3-5 мин.. после окраски препарат промывают струей воды до тех пор, пока стекающая вода не станет прозрачной. Сушат на воздухе или осторожно промокают фильтровальной бумагой. При сложных методах окраски предусматривается последовательное использование нескольких красителей- это позволяет выявить определенные структуры бактерий.

Изучают нативные и окрашенные препараты, используя методы «раздавленной» или «висячей капли».

При изучении подвижности микроорганизмов необходимо отличать истинную подвижность от броуновского движения, которое является следствием ударов о бактерии движущихся в растворе молекул и выявляется в виде колебаний.

При добавлении метилцеллюлозы движение жгутиков становится видимым из-за уменьшении скорости их движения.

Для изучения свойств микроорганизмов необходимо их изолировать от других микроорганизмов и вырастить в виде «чистых культур».

Такие искусственные условия можно создать в пробирке, колбе, чашке Петри. Вся посуда должна быть простерилизована и защищена с помощью пробок или металлических колпачков и крышек.

1. Первый этап исследования – посев инокулята. Высев на чашки Петри со средой.

 

Методы основаны на том, что отдельные микроорганизмы развиваются либо на поверхности, либо в глубине среды, в которую добавлен агар или другое гелеобразующее вещество.

Петлю стерилизуют в пламени горелки. И только потом приоткрыв чашку Петри вносят материал.

 

Посев петлей.

 

· Посевной материал втирают петлей в поверхность среды у края чашки.

· Избыток снимают, проколов петлей агар.

· Оставшийся материал рассеивают паралельными штрихами по стерильной поверхности среды.

Посев шпателем.

 

· Материал наносят на поверхность среды петлей или пипеткой.

· Затем стеклянным или металлическим шпателем тщательно втирают материал по всей поверхности агара.

· После посева металлический шпатель прокаливают в пламени горелки, а стеклянный помещают в дезинфицирующий раствор.

 

Посев тампоном.

 

· Тампон и исследуемым материалом вносят в чашку и круговым движениями втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая тампон и чашку.

Посев на секторы.

 

· Дно чашки расчерчивают на секторы.

· Посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру так, чтобы штрихи с одного сектора не переходили на другой.

Посев газоном.

 

· 1 мл исследуемого материала (жидкой бульонной культуры или взвеси микробов в физиологическом растворе) наносят пипеткой и тщательно распределяют по всей поверхности среды.

· Избыток материала отсасывают пипеткой и вместе с ней помещают в дезинфицирующий раствор.

После посева чашки закрывают и переворачивают вверх дном.

Надписи на чашках делают со стороны дна.

На пробирках – в верхней части.

 

Чтобы очистить бактериальные культуры, загрязненные грибами или микроорганизмами из природных популяций, добавляют в среду вещества, подавляющие рост тех или иных микроорганизмов, например, нистатин в культуру, сильно загрязненную грибами.

 

Посевы инкубируются в термостате 18 – 24 часов. В течение этого времени из отдельных микробных клеток формируются изолированные колонии.

2. Второй этап исследования – изучение изолированных колоний.

Колония – это изолированное скопление микробных клеток одного вида на плотной питательной среде.

Каждому виду микробов присуща типичная форма колоний.