Работа 1. Определение мочевой кислоты в биологических жидкостях

Принцип метода. Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета, оптическая плотность которого при 640 нм пропорциональна концентрации мочевой кислоты в исследуемой жидкости (моча)

Порядок выполнения работы:

Реактивы	Калибровочная проба	Опытная проба
Моча (разведение 1:10)	-	2 мл
Калибровочный раствор мочевой кислоты (0,03 ммоль/л)	2 мл	-
Раствор карбоната натрия (20%)	1 мл	1 мл
Фосфорновольфрамовый реактив	0,5 мл	0,5 мл

 

Содержимое пробирок тщательно перемешать. Через 30 мин определить оптическую плотность на ФЭКе при 640 нм (красный светофильтр) против воды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см. Расчет экскреции мочевой кислоты производится по формуле:

С = (Е_опыт: Е_калиб) х 0,03 х 10 х Д

где: С – концентрация мочевой кислоты в пробе

Е_опыт - оптическая плотность опытной пробы

Е_калиб – оптическая плотность калибровочной пробы

0,03 - содержание мочевой кислоты в калибровочной пробе

10 - перерасчет на разведение мочи

Д - суточный диурез (♂ - 1,5 л/сут, ♀ - 1,2 л/сут, дети – 1 л/сут)

Нормальные значения:

Экскреция мочевой кислоты с мочой: 1,6 – 3,54 ммоль/сут (270 – 600 мг/сут)

Концентрация мочевой кислоты в крови: ♂ - 0,24 – 0,50 ммоль/л

♀ - 0,16 – 0,44 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение определения мочевой кислоты и уратов в биологических жидкостях:

Гиперурикемия – повышение концентрации мочевой кислоты в крови

Гиперурикурия – увеличение выделения мочевой кислоты с мочой (урикозурия)

Гипоурикурия -уменьшение выделения мочевой кислоты с мочой

Возможные причины гиперурикемии:

I. Первичные гиперурикемии (обусловлены энзимодефектами): подагра, синдром Леш-Нихана

II. Вторичные гиперурикемии:

- алиментарные (пищевые);

- нарушение экскреции мочевой кислоты при поражении почек;

- усиление катаболизма (распада) собственных нуклеопротеинов тканей.

Варианты изменения концентрации мочевой кислоты в крови и моче:

Гиперурикемия Гипоурикурия	Подагра (во время приступа) Поражение почек (острый и хронический нефрит)
Гиперурикемия Гиперурикурия	Избыточное потребление нуклеопротеинов с пищей (мясо,икра и др) Катаболизм собственных нуклеопротеинов тканей и органов (лейкоз, лучевая болезнь, гемолиз, злокачественный рост, лечение цитолитиками и цитостатиками, артрит, диабет, голодание, аллергия, гипоксия и др.)
Гипоурикемия Гипоурикурия	Прием KJ, хинина, атропина Прогрессирующая мышечная дистрофия

Задания для СРС во внеучебное время

Задания для самоконтроля подготовки к практическому занятию (тесты):

1. Источниками атомов азот при биосинтезе пуринового ядра являются:

а) асп, глу(н), гли

б) глу, ала, про

в) лиз, ала, гли

г) три, мет,гли

2. Синтез пуриновых нуклеотидов замедляется при недостатке витамина:

а) аскорбиновой кислоты

б) пантотеновой кислоты

в) фолиевой кислоты

г) рибофлавина

3. Инозиновая кислота – это нуклеотид, пуриновая часть которого представлена:

а) гипоксантином

б) ксантином

в) аденином

г) гуанином

4. Конкурентным ингибитором ксантиноксидазы является:

а) аллопуринол

б) гипоксантин

в) метилурацил

г) эритромицин

5. «Пиримидиновый голод» наблюдается при

а) авитаминозах

б) гипоэнергетических состояниях

в) синдроме Леш-Нихана

г) отрицательном азотистом балансе

д) оротацидурии

6. Значительное снижение активности фермента гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы имеет место при

а) синдроме Леш-Нихана

б) алкаптонурии

в) оротацидурии

г) синдроме Вернике-Корсакова

7. Гиперурикемия – это повышение в крови:

а) мочевины

б) аммиака

в) мочевой кислоты

г) оротовой кислоты

8. Выберите правильные ответы. Причиной развития подагры могут быть следующие метаболические нарушения:

а) активация синтеза пуриновых нуклеотидов

б) активация синтеза пиримидиновых нуклеотидов

в) подавление реутилизации пуриновых нуклеотидов

г) недостаточность фолиевой кислоты

9. Соли мочевой кислоты называются:

а) нитраты б) карбонаты

в) оксалаты г) ураты

10. Выделение мочевой кислоты с мочой у здорового человека в норме составляет:

а) 1 - 2 г/сут б) 270-600 мг/сут

в) 20-30 мг/сут г) 20 - 35 г/сут

 

Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время:

1. Какой конечный продукт образуется при катаболизме пуриновых азотистых оснований?

2. Какие конечные продукты образуются при катаболизме пиримидиновых азотистых оснований?

3. С какого метаболита начинается синтез пуриновых нуклеотидов de novo?

4. Какие аминокислоты участвуют в синтезе пуринов?

5. Назовите промежуточный метаболит в синтезе АМФ и ГМФ.

6. Как регулируется синтез пуриновых нуклеотидов?

7. Какие вещества участвует в синтезе пиримидиновых нуклеотидов?

8. Назовите промежуточный метаболит в синтезе пиримидиновых нуклеотидов.

9. При участии, какого белка образуются дезоксирибонуклеотиды?

10. Почему структурные аналоги азотистых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов нашли применение в качестве противовирусных и противоопухолевых препаратов?

11. Каковы биохимические принципы лечения подагры, подагрических синдромов и кризов?

12. Какими биохимическими методами анализа можно подтвердить или исключить подагру?

13. Почему длительное время подагру считали "болезнью гурманов"?

14. Почему подагра считается «привилегией» мужчин?

15. С чем связан тот факт, что в последние годы увеличилось количество заболеваний, связанных с нарушениями обмена нуклеиновых кислот?

16. Каковы биохимические методы коррекции нарушений метаболизма при развитии мочекаменной болезни, обусловленной образованием уратных камней?

17. Каковы биохимические механизмы развития гиперурикемии у больных синдромом Леш-Нихана?